1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
203
204
205
206
207
208
209
210
211
212
213
214
215
216
217
218
219
220
221
222
223
224
225
226
227
228
229
230
231
232
233
234
235
236
237
238
239
240
241
242
243
244
245
246
247
248
249
250
251
252
253
254
255
256
257
258
259
260
261
262
263
264
265
266
267
268
269
270
271
272
273
274
275
276
277
278
279
280
281
282
283
284
285
286
287
288
289
290
291
292
293
294
295
296
297
298
Leica BOND-MAX Slide Boyama Cihazı (Tıbbi Amaçlı)
Bond Reaktiflerinin Kullanimi
13.5 Genel Smirlamalar
• immtinohistokimya ve hucre igi hibridizasyon boyama sonuclannin yorumlanabilmesi, lamlann
hazirlanmasi, uygun reaktiflerin secimi, doku secimi, bunlann sabitlestirilmesi ve isleme tabi
tutulmasi gibi konularda bzel egitim gerektiren cok adimh teshise yonelik proseslerdir.
• Doku boyama, boyama islemi bncesinde dokunun islenmesine ve stirece tabi tutulmasma baghdir.
Diger dokular veya fluidik ile uygun olmayan sabitleme, donma, erime, yikama, kuruma, isitma,
bbltimlendirme veya kirliliksonucunda yapay dokular, antikor yakalama veya yanlis pozitif sonuclar
ortaya cikabilir. Uyumlu olmayan sonuclar sabitleme ve yerlestirme ybntemlerindeki
degisikliklerden veya dokulardaki icsel duzensizliklerden kaynaklanabihr.
• Asin veya tarn olmayan bir bnceki boyamaya uygulanan ikinci boyama islemi sonuclann uygun
yorumlamalanni riske atabilir.
• Herhangi bir boyamanin veya bunun mevcut olmamasimn klinik yorumlamasi uygun kontroller
kullanilarak morfolojik cahsmalar ile tamamlanmahdir ve bir kalifiye patolog tarafmdan hastanm
klinik gecmisi ve diger teshise yonelik testlerle degerlendirilmelidir.
• Hepatit B virusu ile enfekte olmus ve hepatit B ytizey antijeni iceren (HbsAg) kisilerin dokulan
yaban turpu peroksidaz (Referans 19) ile belirli bir bzelligi olmayan boyama gbsterebilirler.
• Zayif bir bicimde ayrilmis neoplazmalardaki beklenmedik negatif reaksiyonlar antijen icin kodlama
yapan gende (genlerde) veya mutasyonda (mutasyonlar) kayip olmasi veya antijenin gbrunumiinde
dikkat cekici diisiis veya kayiptan kaynaklanabihr. Tumbrlerdeki beklenmedik pozitif boyama
morfolojik olarak benzer normal hucrelerde genehikle disa vurulmayan bir antijenin
disavurumundan kaynaklanabihr, veya bir diger hucre kbkeniyle iliskilendirilmis
immunohistokimyasal ve morfolojik bzehiklergelistiren bir neoplazmadaki bir antijenin iz birakmasi
veya yakalanmasmdan kaynaklanabihr (divergent differentiation). Tumbrlerin histopatolojik
siniflandinlmasi pozitif bir bilim degildir ve bazi yaymlardaki beklenmeyen boyamaya dair raporlar
tartismahdir.
• Önceden test edilmemis dokularda reaktifler beklenmedik reaksiyonlar gbsterebilirler.
Neoplazmadaki antijen disavurumu/hedef nukleik asidin biyolojik degiskenligi veya diger patolojik
dokulardan dolayi test edilmis doku gruplarmda bile umulmadik reaksiyonlar olmasi olasihgi
tamamen gbz ardi edilemez. Herhangi bir beklenmedik reaksiyonu rapor edebilmek icin yerel
dagiticmiz veya Leica Microsystems'm bblgesel ofisi ile temasa geciniz.
IHC Bloke etme adimlannda sekonder serum olarak kullanilan ayni hayvansal kaynaktan alman normal veya
bagisik olmayan serum, dogal antikorlar veya otoantikorlardan kaynaklanan yanlis negatif veya yanlis
pozitif sonuclara yol acabilir.
IHC IHC'deki yanlis pozitif sonuclar alt-tabaka reaksiyon urunleri veya proteinlerin immunolojik olmayan
baglanmalarmdan dolayi gbrulebilir. Bunlarayni zamanda kullanilan immunohistokimyasal boyamanin
tipine bagh olarak (Referans 16), endojen biyotin (brnegin; karaciger, gbgtis, beyin, bbbrek), endojen
peroksidaz aktivitesi (sitokrom C) veya sbzde peroksidaz (alyuvar) aktivitesinden kaynaklanabihr.
IHC IHC'deki yanlis negatif vakalar cesitli faktorlerden kaynaklanabihr; buna gercek antijen azalmasi, tumor
"dedifferentiation" (hucrelerin daha genel veya daha ilkel birduruma dbnmesi) esnasmda kayip veya
yapisal degisiklik veya sabitleme ve stirece tabi tutma esnasmda insan eliyle yapilmis degisikliklerden
kaynaklanabihr. Herhangi bir immunohistokimyasal testte oldugu gibi bir negatif sonuc antijenin
saptanamadigi anlamma gelir, bu incelenen dokularda antijen olmadigi anlamma gelmez.
ISH ISH'deki yanlis pozitif sonuclar probun diger nukleik asit dizilerine capraz reaksiyona girme
kabiliyetinden dolayi ve ayni zamanda probun veya saptama reaktiflerinin dokulara veya doku
bilesenlerine (Referans 18) belli bir bzelligi olmayan baglanmasmdan kaynaklanabihr. Negatif doku ve
reaktif kontroheri yanlis pozitif boyamanin kimlik belirleme islemine yardimci olabilmesi icin testlere
dahil edilmelidirler.
ISH DNA ve RNA nukleaz aktivitesi tarafmdan yikilmaya ugrayabihrler (Referans 8, 19). Bu yiizden, nukleik
asit yikimmin saptanabilmesi icin Pozitif Kontrol Probunun hasta dokusu ile test edilmesi ve paralel
olarak spesifik prob ve hasta dokusunun test edilmesi bnemlidir. Nukleik asitlerin sabitleyici etkilerden
korunmasi seciminden dolayi, %10'luk nbtrtamponlanmis formalinde sabitlenmis doku tavsiye
edilmektedir (Referans 19). Herhangi bir hucre igi hibridizasyon testinde oldugu gibi, bir negatif sonuc
nukleik asidin saptanamamasi anlamma gelir, incelenen dokularda nukleik asidin olmadigmi anlamma
gelmez.
Leica Bond Kullamm Kilavuzu Rev H01 © Leica Biosystems Melbourne 2009 257