1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
203
204
205
206
207
208
209
210
211
212
213
214
215
216
217
218
219
220
221
222
223
224
225
226
227
228
229
230
231
232
233
234
235
236
237
238
239
240
241
242
243
244
245
246
247
248
249
250
251
252
253
254
255
256
257
258
259
260
261
262
263
264
265
266
267
268
269
270
271
272
273
274
275
276
277
278
279
280
281
282
283
284
285
286
287
288
289
290
291
292
293
294
295
296
297
298
Leica BOND-MAX Slide Boyama Cihazı (Tıbbi Amaçlı)
Bond Reaktiflerinin Kullanimi
13.2.4 Geri Kazanim
Dokunun formalin sabitlestirmesi dokudaki aldehit ve amino gruplan arasmda capraz baglantiya
sebep olur ve bu baglann olusumu maskeleme etkilerinden dolayi antikor uretimi kaybma yol
acabilir. Formalin ise epitopun turn tic boyutlu seklini degistirebilecek bir bicimde metilen kopruleri
olusturur. Bazi epitoplar formaline duyarhdir ve formalin sabitleme sonrasmda dtistik
immunreaktivite gbsterir, bu esnada digerleri formaline dayanimhdir.
Nukleik asitler proteinlertarafmdan cevrelenmistir, bu yiizden hedef dizilere prob tarafmdan
erisilebilmesi icin dokunun gecirimli hale getirilmesi gerekmektedir.
Epitop geri kazanim ISI uyarimh epitop geri kazanim (HIER), enzim on islem veya her ikisinin
kombinasyonu yoluyla saglanabilir. HIER, IHC icin epitop geri kazanimmda en yaygm olarak
kullanilan ybntemdir. HIER'm mekanizmasi tarn olarak anlasilamamistir. Hipoteze gore; numunenin
epitop geri kazanim solusyonunda bir ytiksek sicakhga kadar isitilmasi, formalin sabitleme
esnasmda olusmus capraz baglantilann hidrolize olmasma sebep olur. Bu immunohistokimya
tarafmdan daha sonra boyanabilecek olan epitopun yeniden degismesine yol acar. HIER'deki
bnemli faktbrler; sicakhk, zaman ve geri kazanim solusyonunun pH'idir. Bond sisteminde kullanim
icin iki farkh epitop geri kazanim solusyonu vardir: Bir sitrat bazh buffer ve bir EDTA bazh buffer.
Enzim on islemi peptid baglanni kirmak icin ve epitop/hedef nukleik asit dizisini ortaya cikarmak
icin proteohtik enzimler kullanir. Enzim konsantrasyon ve inkubasyon suresi numunenin sabitlenme
suresi ile dogru orantihdir ve uygun bir bicimde optimize edilmehdir. Enzim on islemi sadece bazi
epitoplar icin uygundur ancak ISH protokollerinde sikhkla kullamlmaktadir.
13.3 Kalite Kontrolu
Kullanicilann laboratuanndaki teknik prosedurler ve doku isleme sureclerindeki farkhhklar
sonuclarda ciddi farkhhklara yol acabilir, asagidaki prosedurlere have olarak organizasyon ici
duzenli performans kontrollerini gerektirebilir. Yerel kilavuzlarve ybnetmeliklere basvurulmahdir;
ayni zamanda "CLIA Compliance Handbook: The Essential Guide for the Clinical Laboratory
Second Edition" (Referans 22) ve "Proposed NCCLS guidelines for IHC" (Referans 14) sizin icin
faydah olabilir.
v Sabitlenmis, isleme tabi tutulmus veya gbmulii otopsi/biyopsi/ cerrahi numuneler hastanm
numunelerinde oldugu gibi olabildigince cabuk bir bicimde kontrol edilmehdir. Bu tarz bir kontrol
doku hazirlama isleminden boyama islemine kadar analizin turn basamaklanni kontrol edecektir.
13.3.1 Analiz Dogrulama
Birteshise ybnelik prosedurde antikor, prob veya boyama sisteminin ilk kullanimi bncesinde, antikor
veya probun belirliligi bunlann bilinen pozitif ve negatif dokulan temsil eden bilinen gbruniimleriyle
organizasyonunuzdaki seriler uzerinde test edilerek onaylanmasi gereklidir. Yukanda bzetlenen
prosedurler veya sizin yerel duzenlemeleriniz ve kilavuzlanniz ile NCCLS IHC kullanim kilavuzlan
ve/veya CAP Sertifikasyon Programmin (Referans 14) kalite kontrol tavsiyelerine basvurulmahdir.
Her bir yeni antikor lotu icin veya analiz parametrelerinde herhangi birdegisikhkoldugunda bu kalite
kontrol prosedijrleri tekrar edilmehdir. Kalite kontrolij izole haldeki bagimsiz bir reaktif uzerinde
anlamh bir bicimde gerceklestirilemez, ciinkii tammlanmis bir analiz protokolu ile birlikte eslesen
reaktiflerteshise ybnelik olarak birsaptama sisteminde kullanilmadan once hep birlikte test
edilmehdir. Analiz dogrulama amaciyla uygun olan dokular icin her bir primer antikor prospektiisiine
basvurulmahdir.
Leica Bond Kullanim Kilavuzu Rev H01 © Leica Biosystems Melbourne 2009 251