Bond Reaktiflerinin Kullanimi
13.5 Genel Smirlamalar
• immtinohistokimya ve hucre igi hibridizasyon boyama sonuclannin yorumlanabilmesi, lamlann
hazirlanmasi, uygun reaktiflerin secimi, doku secimi, bunlann sabitlestirilmesi ve isleme tabi
tutulmasi gibi konularda bzel egitim gerektiren cok adimh teshise yonelik proseslerdir.
• Doku boyama, boyama islemi bncesinde dokunun islenmesine ve stirece tabi tutulmasma baghdir.
Diger dokular veya fluidik ile uygun olmayan sabitleme, donma, erime, yikama, kuruma, isitma,
bbltimlendirme veya kirliliksonucunda yapay dokular, antikor yakalama veya yanlis pozitif sonuclar
ortaya cikabilir. Uyumlu olmayan sonuclar sabitleme ve yerlestirme ybntemlerindeki
degisikliklerden veya dokulardaki icsel duzensizliklerden kaynaklanabihr.
• Asin veya tarn olmayan bir bnceki boyamaya uygulanan ikinci boyama islemi sonuclann uygun
yorumlamalanni riske atabilir.
• Herhangi bir boyamanin veya bunun mevcut olmamasimn klinik yorumlamasi uygun kontroller
kullanilarak morfolojik cahsmalar ile tamamlanmahdir ve bir kalifiye patolog tarafmdan hastanm
klinik gecmisi ve diger teshise yonelik testlerle degerlendirilmelidir.
• Hepatit B virusu ile enfekte olmus ve hepatit B ytizey antijeni iceren (HbsAg) kisilerin dokulan
yaban turpu peroksidaz (Referans 19) ile belirli bir bzelligi olmayan boyama gbsterebilirler.
• Zayif bir bicimde ayrilmis neoplazmalardaki beklenmedik negatif reaksiyonlar antijen icin kodlama
yapan gende (genlerde) veya mutasyonda (mutasyonlar) kayip olmasi veya antijenin gbrunumiinde
dikkat cekici diisiis veya kayiptan kaynaklanabihr. Tumbrlerdeki beklenmedik pozitif boyama
morfolojik olarak benzer normal hucrelerde genehikle disa vurulmayan bir antijenin
disavurumundan kaynaklanabihr, veya bir diger hucre kbkeniyle iliskilendirilmis
immunohistokimyasal ve morfolojik bzehiklergelistiren bir neoplazmadaki bir antijenin iz birakmasi
veya yakalanmasmdan kaynaklanabihr (divergent differentiation). Tumbrlerin histopatolojik
siniflandinlmasi pozitif bir bilim degildir ve bazi yaymlardaki beklenmeyen boyamaya dair raporlar
tartismahdir.
• Önceden test edilmemis dokularda reaktifler beklenmedik reaksiyonlar gbsterebilirler.
Neoplazmadaki antijen disavurumu/hedef nukleik asidin biyolojik degiskenligi veya diger patolojik
dokulardan dolayi test edilmis doku gruplarmda bile umulmadik reaksiyonlar olmasi olasihgi
tamamen gbz ardi edilemez. Herhangi bir beklenmedik reaksiyonu rapor edebilmek icin yerel
dagiticmiz veya Leica Microsystems'm bblgesel ofisi ile temasa geciniz.
IHC Bloke etme adimlannda sekonder serum olarak kullanilan ayni hayvansal kaynaktan alman normal veya
bagisik olmayan serum, dogal antikorlar veya otoantikorlardan kaynaklanan yanlis negatif veya yanlis
pozitif sonuclara yol acabilir.
IHC IHC'deki yanlis pozitif sonuclar alt-tabaka reaksiyon urunleri veya proteinlerin immunolojik olmayan
baglanmalarmdan dolayi gbrulebilir. Bunlarayni zamanda kullanilan immunohistokimyasal boyamanin
tipine bagh olarak (Referans 16), endojen biyotin (brnegin; karaciger, gbgtis, beyin, bbbrek), endojen
peroksidaz aktivitesi (sitokrom C) veya sbzde peroksidaz (alyuvar) aktivitesinden kaynaklanabihr.
IHC IHC'deki yanlis negatif vakalar cesitli faktorlerden kaynaklanabihr; buna gercek antijen azalmasi, tumor
"dedifferentiation" (hucrelerin daha genel veya daha ilkel birduruma dbnmesi) esnasmda kayip veya
yapisal degisiklik veya sabitleme ve stirece tabi tutma esnasmda insan eliyle yapilmis degisikliklerden
kaynaklanabihr. Herhangi bir immunohistokimyasal testte oldugu gibi bir negatif sonuc antijenin
saptanamadigi anlamma gelir, bu incelenen dokularda antijen olmadigi anlamma gelmez.
ISH ISH'deki yanlis pozitif sonuclar probun diger nukleik asit dizilerine capraz reaksiyona girme
kabiliyetinden dolayi ve ayni zamanda probun veya saptama reaktiflerinin dokulara veya doku
bilesenlerine (Referans 18) belli bir bzelligi olmayan baglanmasmdan kaynaklanabihr. Negatif doku ve
reaktif kontroheri yanlis pozitif boyamanin kimlik belirleme islemine yardimci olabilmesi icin testlere
dahil edilmelidirler.
ISH DNA ve RNA nukleaz aktivitesi tarafmdan yikilmaya ugrayabihrler (Referans 8, 19). Bu yiizden, nukleik
asit yikimmin saptanabilmesi icin Pozitif Kontrol Probunun hasta dokusu ile test edilmesi ve paralel
olarak spesifik prob ve hasta dokusunun test edilmesi bnemlidir. Nukleik asitlerin sabitleyici etkilerden
korunmasi seciminden dolayi, %10'luk nbtrtamponlanmis formalinde sabitlenmis doku tavsiye
edilmektedir (Referans 19). Herhangi bir hucre igi hibridizasyon testinde oldugu gibi, bir negatif sonuc
nukleik asidin saptanamamasi anlamma gelir, incelenen dokularda nukleik asidin olmadigmi anlamma
gelmez.
Leica Bond Kullamm Kilavuzu Rev H01 © Leica Biosystems Melbourne 2009 257