Bond Reaktiflerinin Kullanimi
13.4 Boyamanin Yorumlanmasi
immtinohistokimyasal /hucre igi hibridizasyon prosedurleri hakkmda tecrtibe sahibi kalifiye bir
patolog sonuclar uzerinde yorumlamalara gidilmeden once mutlaka kontrolleri degerlendirmelidir ve
boyama islemine tabi tutulmus tirtinti tanimlamahdir.
Antijen saptamanm duyarhhgi ve belirliligi kullanilan spesifik primer antikora baglidir. Arzu edilen
boyamanin saglanabilmesi icin, degisiklik gbsteren inkubasyon zamanlari ve/veya spesifik antikor
konsantrasyonuyla Bond sistemi uzerinde her bir spesifik antikor optimize edilmelidir. Spesifik
antikorun optimize edilmesinde basansiz olunmasi yetersiz antijen saptanmasma yol acabilir.
13.4.1 Pozitif Doku Kontrolleri
Turn reaktiflerin uygun bir bicimde islevlerini yerine getirebildiklerinden emin olabilmek icin ilk once pozitif
doku kontrolu incelenmelidir.
DAB tabanh sistemler kullanildigmda, hedef hucrelerle bir kahverengi reaksiyon uriiniinun varhgi
pozitif reaktiviteyi gbsterir (3,3' diaminobenzidine tetrachloride, DAB). Bond Polimer Kirmizi
Saptama Sistemleri kullanildigmda, hedef hucrelerle bir kirmizi reaksiyon uriiniiniin varhgi pozitif
reaktiviteyi gbsterir. Eger pozitif doku kontrolu pozitif boyama sergilemekte basansiz olursa, test
numunelerine iliskin sonuclar gecersizsayilmahdir.
13.4.2 Negatif Doku Kontrolleri
Primer antikor/prob tarafmdan hedef antijenin/ntikleik asitin etiketlenmesinin belirliliginin
dogrulanabilmesi icin pozitif doku kontrolu sonrasmda negatif doku kontrolu yapilmahdir.
Negatif doku kontrolijndeki spesifik boyamanin yoklugu hucreler/hucresel bilesenlere antikor/prob
capraz reaktivitesinin yoklugunu dogrular.
Eger negatif harici doku kontrolunde spesifik boyama ortaya cikarsa (yanhs pozitif boyama),
sonuclar gecersiz olarakdusiiniilebilir. Eger mevcutsa, belirli olmayan boyama, genellikle bir
dagilmis gbrtinume sahiptir. Bagdoku'nun sporadik boyamasi yogun formalin sabit dokulan
kesitlerinde gbzlenebilir. Boyama sonuclannin yorumlanabilmesi icin bozulmamis hucreler
kullanilmahdir. Nekrotikveya bozulmaya ugramis hucreler coklukla belirsiz bir bicimde boyanirlar.
13.4.3 Hasta Dokusu
Primer antikor/prob ile en son boyanan hasat numuneleri incelenmelidir.
Pozitif boyama yogunlugu negatif reaktif kontroliiniin herhangi bir belirli olmayan arka plan
boyamasi cercevesinde degerlendirilmelidir. Herhangi bir immuniihistokimyasal/ hucre igi
hibridizasyon testiyle bir negatif sonuc incelenen dokuda veya hucrelerde antijen/ntikleik asidin
olmamasi degil, antijen/ntikleik asidin saptanamamasi anlamina gelir.
Egergerekliyse, yanhs pozitif reaksiyonlann belirlenebilmesi icin antikorlann bir panelini kullanmiz.
Leica Bond Kullamm Kilavuzu Rev H01 © Leica Biosystems Melbourne 2009 256