Bond Reaktiflerinin Kullanimi
13.2.4 Geri Kazanim
Dokunun formalin sabitlestirmesi dokudaki aldehit ve amino gruplan arasmda capraz baglantiya
sebep olur ve bu baglann olusumu maskeleme etkilerinden dolayi antikor uretimi kaybma yol
acabilir. Formalin ise epitopun turn tic boyutlu seklini degistirebilecek bir bicimde metilen kopruleri
olusturur. Bazi epitoplar formaline duyarhdir ve formalin sabitleme sonrasmda dtistik
immunreaktivite gbsterir, bu esnada digerleri formaline dayanimhdir.
Nukleik asitler proteinlertarafmdan cevrelenmistir, bu yiizden hedef dizilere prob tarafmdan
erisilebilmesi icin dokunun gecirimli hale getirilmesi gerekmektedir.
Epitop geri kazanim ISI uyarimh epitop geri kazanim (HIER), enzim on islem veya her ikisinin
kombinasyonu yoluyla saglanabilir. HIER, IHC icin epitop geri kazanimmda en yaygm olarak
kullanilan ybntemdir. HIER'm mekanizmasi tarn olarak anlasilamamistir. Hipoteze gore; numunenin
epitop geri kazanim solusyonunda bir ytiksek sicakhga kadar isitilmasi, formalin sabitleme
esnasmda olusmus capraz baglantilann hidrolize olmasma sebep olur. Bu immunohistokimya
tarafmdan daha sonra boyanabilecek olan epitopun yeniden degismesine yol acar. HIER'deki
bnemli faktbrler; sicakhk, zaman ve geri kazanim solusyonunun pH'idir. Bond sisteminde kullanim
icin iki farkh epitop geri kazanim solusyonu vardir: Bir sitrat bazh buffer ve bir EDTA bazh buffer.
Enzim on islemi peptid baglanni kirmak icin ve epitop/hedef nukleik asit dizisini ortaya cikarmak
icin proteohtik enzimler kullanir. Enzim konsantrasyon ve inkubasyon suresi numunenin sabitlenme
suresi ile dogru orantihdir ve uygun bir bicimde optimize edilmehdir. Enzim on islemi sadece bazi
epitoplar icin uygundur ancak ISH protokollerinde sikhkla kullamlmaktadir.
13.3 Kalite Kontrolu
Kullanicilann laboratuanndaki teknik prosedurler ve doku isleme sureclerindeki farkhhklar
sonuclarda ciddi farkhhklara yol acabilir, asagidaki prosedurlere have olarak organizasyon ici
duzenli performans kontrollerini gerektirebilir. Yerel kilavuzlarve ybnetmeliklere basvurulmahdir;
ayni zamanda "CLIA Compliance Handbook: The Essential Guide for the Clinical Laboratory
Second Edition" (Referans 22) ve "Proposed NCCLS guidelines for IHC" (Referans 14) sizin icin
faydah olabilir.
v Sabitlenmis, isleme tabi tutulmus veya gbmulii otopsi/biyopsi/ cerrahi numuneler hastanm
numunelerinde oldugu gibi olabildigince cabuk bir bicimde kontrol edilmehdir. Bu tarz bir kontrol
doku hazirlama isleminden boyama islemine kadar analizin turn basamaklanni kontrol edecektir.
13.3.1 Analiz Dogrulama
Birteshise ybnelik prosedurde antikor, prob veya boyama sisteminin ilk kullanimi bncesinde, antikor
veya probun belirliligi bunlann bilinen pozitif ve negatif dokulan temsil eden bilinen gbruniimleriyle
organizasyonunuzdaki seriler uzerinde test edilerek onaylanmasi gereklidir. Yukanda bzetlenen
prosedurler veya sizin yerel duzenlemeleriniz ve kilavuzlanniz ile NCCLS IHC kullanim kilavuzlan
ve/veya CAP Sertifikasyon Programmin (Referans 14) kalite kontrol tavsiyelerine basvurulmahdir.
Her bir yeni antikor lotu icin veya analiz parametrelerinde herhangi birdegisikhkoldugunda bu kalite
kontrol prosedijrleri tekrar edilmehdir. Kalite kontrolij izole haldeki bagimsiz bir reaktif uzerinde
anlamh bir bicimde gerceklestirilemez, ciinkii tammlanmis bir analiz protokolu ile birlikte eslesen
reaktiflerteshise ybnelik olarak birsaptama sisteminde kullanilmadan once hep birlikte test
edilmehdir. Analiz dogrulama amaciyla uygun olan dokular icin her bir primer antikor prospektiisiine
basvurulmahdir.
Leica Bond Kullanim Kilavuzu Rev H01 © Leica Biosystems Melbourne 2009 251