Bond Reaktiflerinin Kullanimi
13.2.2 Doku Hazirlama
Bond sistemini kullanan immtinohistokimyasal ve hucre igi hibridizasyon boyama amaciyla doku
hazirlayabilmek icin %10'luk nbtr-tamponlanmis formalinin dokusunun 15 ila 20 katlik hacmini
kullanmanizi tavsiye etmekteyiz. Sabitleme (fixation) oda sicakligmda gerceklestirilebilir (15-25
°C).
HER2 testi icin, bakmiz (doku hazirlama tavsiyeleri Referans 10) veya kendi kullanim kilavuzunuza
ve yerel duzenlemelere damsimz.
Doku kesmeyi kolaylastirmak ve ince dilim kesmeye yarayan mikrotom bicaklanndan zarar
gbrmeyi bnlemek icin, doku isleme bncesinde kemik dokulan kirecten anndirilmalidir (bakmiz
Referanslar 11 ve 12).
1988 senesi US Klinik Laboratuar Gelistirme / Duzenleme Yasasi (CLIA) 42 CFR 493.1259(b)
"Laboratuar inceleme tarihinden itibaren en azmdan on yil boyunca boyanmis lamlan elinde
tutmahdir ve inceleme tarihinden itibaren en az iki yil boyunca brnek bloklarmi elinde saklamahdir"
(Referans 13); siz de kendi bblgenizdeki yerel duzenlemeler hakkmda bilgi sahibi olabilmek icin
yetkili mercilere danismahsmiz.
Ytiklti cam lamlar uzerinde 3-5 urn kalinhginda kesitler kesilmeli ve toplanmahdir (bazi spesifik doku
tipleri farkh kesit kalinliklan gerektirebilir). Dokuyu kurutmak icin iyi birsekilde kurutulmus lamlar 60
°C'hk (±5 °C) finnda 10-30 dakika bekletilmelidir, veya bir bnceki geceden 37 °C'de bekletilmelidir.
Lamlar ayni zamanda Bond-Ill ve Bond-maxsistemlerinde finnlanabilir. Lamlar Bond uzerinde
firmlama bncesinde hava ile iyi bir bicimde kurutulmahdir. Numune hazirlama hakkmda daha
aynntih bilgi edinebilmek icin Referanslar 13, 14 ve 15'e basvurunuz.
Sayfa 96'da "Hizh Baslangic" kismmda aciklandigi gibi Bond ,Evrensel Lam Etiketlerini numuneye
ve kontrol lamlanna uygulaymiz (Katalog No. S21.2011.110). Bond-x sistemi kullanicilan primer
antikorun bzelliklerine uygun birybntemle el ile epitop geri kazanim sonrasmda numunelerin
mumunu gidermeli (dewax) ve tekrar normal suyunu kazandirmahdir.
Bond-Ill ve Bond-max sistemleri uzerinde dewax, rehydration ve epitop geri kazanim otomatik
olarakyapilmaktadir.
13.2.3 Dewaxing ve Firmlama
immiinohistokimya icin parafine gbmiilii doku numunelerinin parafin mumu kaldirilmah ve
numuneye tekrar suyu kazandirilmahdir. Bond-Ill ve Bond-maxsistemlerinde, Bond Dewax
Solusyonu kullanilarak mum kaldinhrve numunelere sulan geri kazandinhr. Bond sistemi bu
prosesi otomatiklestirebilmek icin Dewax protokolleri icerir.
Dewaxing bncesinde, Bond dokunun lama olan yapismasmi gehstirebilmek icin dokuyu finnlayabilir.
Bond Bake (Firmlama) ve Dewax (Mumunu Giderme) protokolleri hem firmlama hem de dewaxing
proseslerini otomatiklestirir.
v Firmlama ve mumunu giderme icin Bond isleme modiiliine yerlestirme bncesinde doku herhangi su
kalmtismi bnleyebilmek icin hava ile kurutulmus olmahdir.
Leica Bond Kullanim Kilavuzu Rev H01 © Leica Biosystems Melbourne 2009 250