Bond Reaktiflerinin Kullanimi
13.1.1 Bond Saptama Sistemleri
Leica Microsystems, bzellikle Bond icin gelistirilmis birdizi saptama sistemleri saglar. Bunlar
arasmda en bnde geleni, streptavidin ve biotin kullanilmaksizm keskin tammlama ile
birlestirilmis ytiksekyogunluklu boyama saglayan, Bond Polymer Refine Detection (Bond
Polimer Ratine Saptama) sistemidir.
Mevcut Bond saptama sistemleri asagidaki kisimlarda listelenmistir.
• "Bond Polimer Saptama Sistemleri (Bond Polymer Detection Systems - DAB)" sayfa 245
• "Bond Polimer Saptama Sistemleri (Bond Polymer Detection Systems - DAB)" sayfa 246
• "Bond Etiketlenmis Streptavidin-Biotin Saptama Sistemleri (Bond Labelled Streptavidin-Biotin
Detection System - DAB)" sayfa 246
Bond Polimer Saptama Sistemleri (DAB)
Bu DAB tabanh sistemler streptavidin ve biotin kullanimmi bnlerve bu nedenle endojen biotin
sonucunda meydana gelen bzel olmayan boyamayi engellerler. Endojen biotin'e; gastrointestinal
sistem, bobrek, karaciger ve gogus kanseri gibi bazi dokular icerisinde yaygin olarak rastlanir. Bond
polimer saptama sistemleri, etiketlenmis streptavidin - biotin sistemlerinden daha yiiksek bir hassasiyete
sahip olup yiiksek primer antikor dilusyonlan ile sonuclanirlar.
Uc Bond Polimer Saptama Sistemi bulunmaktadir:
• Bond Polimer Rafine Saptama (Bond Polymer Refine Detection): Primer Bond Saptama Sistemi'dir.
Hedef antijene baglanan antikorun veya ntikleik aside baglanan probun keskin tariflenmesi ile
birlestirilmis ytiksekyogunluklu boyama saglayan birsistemdir.
• Bond Polimer Yogun Saptama (Bond Polymer Intense Detection): DAB reaksiyon uriiniinun yogun
ifadesine gereksinim duyan uygulamalar icin uygundur-giiclii immunoboyama uretirve hassasiyeti
maksimize eder.
• Bond Polimer Tammlama Saptama (Bond Polymer Define Detection): Reaksiyon iiriinii; hucreler
icerisindeki zara bagh antijenlerin daha detayh birsekilde gbruntiilenmesi ve yerlerinin
belirlenmesine imkan veren keskin, acikca tanimlanmis alanlar icerisinde, ornegin CD isaretleyiciler
gibi, cbkeltilir. Boyama yogunlugu Yogunluk veya Rafine'ye gbreli olarak azaltilabilir.
Bu saptama sistemlerinde kullanilan basamaklar asagidaki gibidir:
1. Hidrojen peroksit ile inktibasyon.
2. Ozel primer antikor veya prob uygulamasi.
3. Baglayici post primer antikor ile inktibasyon
4. Polimer yaban turpu peroksidaz (HRP) - sekonder antikor esleniklerini kapsayan
polimer reaktif ile inktibasyon.
5. DAB'li kompleksin gbriintiilenmesi
6. Hticre cekirdeginin saptanmasma imkan veren hematoksilin ters boyama (hematoxylin
counterstaining).
Sonuclann inkubasyonu, yikanmasi ve yorumlanmasi, Bond Etiketlenmis Streptavidin-Biotin
Saptama Sistemleri icin aciklandigi gibi gerceklestirilir.
Eger daha giiclii yogunluk istenirse turn Bond primer saptama sistemleri icin asagidaki opsiyonlar
mevcuttur:
(i) Primer antikor veya prob ve / veya saptama sistemi bilesenleri icin inktibasyon stirelerinin
arttirilmasi.
(ii) Bir Bond DAB Arttinci (Enhancer) asimi kullanimi. Tek basma arttincinin boyama
yogunlugu seviyesini, Yogun saptama sistemi tarafmdan uretilen ile ayni dereceye
yiikseltmeyecegini gbz ardi etmeyiniz.
Leica Bond Kullamm Kilavuz