Protokoller
10. On boyama protokolleri icin adim sicakhklan asagidaki tabloda verilen arahklarda olmahdir:
Protokol Adimi Sicakhk Arahgi (°C)
Finnlama ve Dewax, finnlama 30-80
adimi
Isil On Islem 35 -100
Enzim On Islemi 35 -100
Denaturation (Denaturasyon) 70 -100
Hybridization (Hibridizasyon) 37 -45
11. Adim inkubasyon sureleri asagidaki tablodaki arahklarda olmahdir. Bu arahklarzorunlu degildir:
Protokol Adimi Inkubasyon Arahgi (dakika)
Finnlama ve Dewax, finnlama 1-55
adimi
Isil on islemi (adimlar 1 ve 2) 0-15
Isil on islemi (adimlar 3 ve 4) 5-30
Enzim on islemi (adim 1) 0
Enzim on islemi (adim 2 ve 3,15 5-15
dakika)
Denaturation (Denaturasyon) 5-20
Hybridization (Hibridizasyon) 20-950
Boyama protokolleri, reaktif 0-60
adimlan
Boyama protokolleri, yikama 0-55
adimlan
Genel olarak, reaktif uygulama adimlan icin, Leica Microsystems 30 dakikadan daha uzun
inkubasyon surelerini bnermemektedir. Eger daha uzun surelergerekliyse, ayni reaktifi
uygulamak icin tekrarlanmis/kopyalanmis adimlar olusturulmahdir (bakmiz sayfa 160 "Bir
Reaktif Adimmin Tekrarlanmasi").
12. Her bir adim sicakhk, inkubasyon sureleri (uygulanabildigi kisimlarda) ve bir reaktif ile tarn
olarak tanimlanmahdir.
13. Her bir protokol icin sadece bir karma reaktif (ornegin karma DAB) kullanimma izin vardir. Ardisik
ikili boyama isleminde, iki protokolun her biri icin bir kanstirma adimma izin verilmektedir.
14. Kanstirilmis reaktif sadece iki adim icin kullamlabilmektedir.
8.4.3 Protokollerin igeriye Aktanlmasi
Import (igeriye aktarim) islevi ancak Bond-max (veya Bond-x) ile kombine Bond-IH'e sahipseniz
gecerli olabilir.
iceriye aktarim bir mevcut sisteme bir yeni cihaz tipi eklendiginde kullanihr. Ornegin, eger sadece
Bond-max ve/veya Bond-x isleme modiillerine sahip bir sisteme bir Bond-Ill eklenirse, kullanici
protokollerinin Bond-Ill versiyonlan mevcut olmayacaktir. Bond-Ill sekmesinin protokol adimlanni
doldurabilmek icin asagidaki adimlar tamamlanmahdir:
1. Bond-Ill uzerinde kullanmak istediginiz Bond-x veya Bond-max protokoliinii Protocol setup
(Protokol kurulumu) ekranmdan seciniz ve Open (Ag) uzerine tiklaymiz.
2. Bond-Ill sekmesini seciniz ve Import uzerine tiklaymiz.
Leica Bond Kullamm Kilavuzu Rev H01 © Leica Biosystems Melbourne 2009 162